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技術(shù)文章
TECHNICAL ARTICLES01.根據實(shí)驗需求選擇合適的孔徑
孔徑通常由您的應用或使用目的來(lái)決定。支原體可以用0.1μm孔過(guò)濾器去除。大多數培養基、緩沖溶液、生物液和氣體的常規實(shí)驗室除菌通常采用0.22μm孔過(guò)濾器完成。溶液和溶劑的澄清和預過(guò)濾最好用0.45μm或孔徑的過(guò)濾膜操作。
請參考下方,來(lái)為您的應用選擇匹配的推薦膜和孔徑。
# 0.1um去除支原體
# 0.22um水性溶液的除菌和超凈處理、溶劑的超凈處理(HPLC)
# 0.45um水性溶液的澄清、溶劑的澄清(HPLC)
Tip!
當試圖控制支原體時(shí),可同時(shí)加入環(huán)丙沙星過(guò)濾鹽酸鹽(HCl)。它是一種4-氟喹諾酮類(lèi)抗生素常用來(lái)控制支原體受感染的污染細胞系
02.為您的應用選擇最佳濾膜材質(zhì)
Tip!
您的過(guò)濾器裝置必須和樣品的化學(xué)性質(zhì)*相容。一些過(guò)濾膜含有可能對一些應用造成干擾的無(wú)毒的潤濕劑。另一些濾膜可能結合蛋白質(zhì)或其它大分子,從而導致過(guò)濾器過(guò)早堵塞或高價(jià)值樣品的損失。因此,了解樣品性質(zhì)以及濾膜對與之接觸的溶液的潛在影響是非常重要的。
聚醚砜(PES):濾膜強烈推薦用于過(guò)濾細胞培養基。PES結合蛋白質(zhì)的能力和可提取物含量都非常低。PES膜的流速也高于纖維素或尼龍膜。
#醋酸纖維素酯膜(CA):濾膜對多數大分子的結合親和力非常低,尤其適用于要求低蛋白結合作用的應用,例如含血清培養基的過(guò)濾。
#尼龍膜(聚酰胺NYLON):本質(zhì)上是親水性的,推薦用于對可提取物含量要求非常低的應用,因為它們不含任何潤濕劑、清潔劑或表面活性劑。尼龍膜的耐化學(xué)性能較強,適于過(guò)濾腐蝕性較大的溶液,例如酒精和DMSO。
#特氟龍®(PEFE,聚四氟乙烯):膜本質(zhì)上并且永遠是疏水性的,適于過(guò)濾氣體,包括增濕的空氣。特氟龍膜的耐化學(xué)性良好,這使其非常適于過(guò)濾其它濾膜不能過(guò)濾的溶劑或其它腐蝕性化學(xué)品。由于其疏水性,特氟龍膜在過(guò)濾水性溶液以前必須用溶劑(例如乙醇)預先潤濕。
03.選擇合適濾膜直徑以?xún)?yōu)化流速和膜通量
選擇一個(gè)具有充足的容量或通量,從而能夠快速高效地處理所有樣品的過(guò)濾器。這主要取決于膜的有效表面積。
#過(guò)濾膜直徑50mm 有效過(guò)濾面積19.6cm2,預計通量150-750ml
#過(guò)濾膜直徑70mm 有效過(guò)濾面積39.5cm2,預計通量500-2500ml
#過(guò)濾膜直徑91mm 有效過(guò)濾面積65cm2,預計通量1000-5000ml
較低值為粘性或含顆粒溶液的典型值;較高值為緩沖液或無(wú)血清培養基的典型值
Tip!
1.離心將去除大部分懸浮顆粒并減少過(guò)濾器堵塞,改善流速和吞吐量。
也可以預過(guò)濾減少顆粒負荷和過(guò)早的膜堵塞。
2.液體溫度的影響
對于大多數應用,在室溫下過(guò)濾溶液沒(méi)有問(wèn)題。通常增加溶液的溫度會(huì )增加流速。例如,將細胞培養基的溫度從4℃增加至37℃會(huì )使流速加倍。這最可能是由于培養基粘度的下降。但是,在一些情況下,較低溫度下過(guò)濾會(huì )增加總通量,對血清等含蛋白質(zhì)和脂肪的溶液尤其如此。
3.壓差的影響
對于真空過(guò)濾,建議采用400mm Hg(7.73 psig)的壓差(真空)。再增加壓差只會(huì )使流速提高一點(diǎn),但是可能導致過(guò)量泡沫的形成,因為濾出液中的氣體會(huì )從溶液中逸出產(chǎn)生氣泡。在過(guò)濾加入碳酸氫鹽緩沖液的細胞培養基時(shí)這個(gè)問(wèn)題尤其突出。在較高的壓差下,培養基中溶解的二氧化碳將很快逸出,導致pH值上升,如果培養基中含有血清蛋白則形成過(guò)量的泡沫。
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